RECONOCIMIENTO DE PROTEÍNAS

Material

Gradilla y 4 tubos de ensayo

Pipeta

Vidrio de reloj

Varilla

 

Productos

Disolución de clara de huevo

Ácido acético

HNO₃ concentrado

NaOH 40% y 20%

Sulfato cúprico 1%

Acetato de plomo 5%.

1) Coagulación de Proteínas

Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc. La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados, que al actuar sobre la proteína la desordenan por la destrucción de su estructura terciaria y cuaternaria . 

Procedimiento

Vamos a utilizar una dilución aún espesa de clara de huevo en agua. Colocar en un tubo de ensayo una pequeña cantidad de dicha clara de huevo. Añadir 5 gotas de ácido acético y calentar el tubo a la llama del mechero.

2)   Reacción xantoproteica

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Es debida a la formación de un compuesto aromático nitrado de color amarillo, cuando las proteínas son tratadas con ácido nítrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos bencénicos, especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali vira a un color anaranjado oscuro.

Procedimiento

Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3cm³ de solución problema (clara de huevo). Añadir 1cm³ de HNO₃ concentrado. Calentar al baño maría a 100ºC. Enfriar en agua fría. Añadir gota a gota una disolución de sosa al 40%.

3) Reacción del Biuret

La producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia del enlace peptídico (-CO - NH-) que se destruye al liberarse los aminoácidos.
Cuando una proteína se pone en contacto con una base concentrada, se forma una sustancia compleja denominada biuret, que en contacto con una solución de sulfato cúprico diluida, da una coloración violeta característica.

Procedimiento

Tomar un tubo de ensayo y poner unos 3cm3 de albúmina de huevo. Añadir 2cm3 de solución de hidróxido sódico al 20%. A continuación 4 ó 5 gotas de solución de sulfato cúprico diluida al 1%. Debe aparecer una coloración violeta-rosácea característica.

4) Reacción de los aminoácidos azufrados

Se pone de manifiesto por la formación de un precipitado negruzco de sulfuro de plomo. Se basa esta reacción en la separación mediante un álcali, del azufre de los aminoácidos, el cual al reaccionar con una solución de acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

 
Procedimiento

Poner en el tubo de ensayo de 2 a 3cm³ de albúmina de huevo (clara de huevo). Añadir 2cm³ de solución de hidróxido sódico al 20%. Añadir 10 gotas de solución de acetato de plomo al 5%. Calentar el tubo hasta ebullición. Si se forma un precipitado de color negruzco nos indica que se ha formado sulfuro de plomo, utilizándose el azufre de los aminoácidos, lo que nos sirve para identificar proteínas que tienen en su composición aminoácidos con azufre.